精准每一峰”——安捷伦HPLC标准操作的流程
安捷伦HPLC使用过程详解
一、开机前准备
流动相处理
根据样品性质选择流动相（如甲醇-水、乙腈-缓冲盐等），需使用HPLC级溶剂，水相需超纯水或三天内更换的娃哈哈纯净水。
流动相需用0.45μm滤膜过滤，超声脱气15-30分钟以去除气泡。
溶剂瓶中加入10%异丙醇水溶液（用于在线冲洗泵头），防止隔夜流动相损伤色谱柱。
色谱柱安装
选择与样品匹配的色谱柱（如C18反相柱），按箭头方向连接至柱温箱，确保管路无死体积。
长期未使用的色谱柱需用高有机相（如95%甲醇）保存，避免纯水导致柱效下降。
系统检查
确认废液瓶容量充足，洗针液（甲醇/乙腈）充足，管路无泄漏或堵塞。
二、开机与系统平衡
设备启动
依次开启四元泵→进样器→柱温箱→检测器电源，待自检完成后进入化学工作站。
双击“Instrument1Online”图标联机，设置泵流速为5mL/min，切换溶剂通道排空气泡（压力＞10bar需更换排气阀过滤白头）。
系统平衡
以梯度程序（如甲醇比例从0%升至10%）或等度程序（如95%甲醇）冲洗系统30分钟，基线平稳后记录压力值。
梯度洗脱时需设置时间表，避免盐溶液与有机溶剂直接混合导致沉淀。
三、安捷伦HPLC方法编辑与运行
方法创建
在化学工作站中新建方法，设置泵参数（流速、梯度）、柱温（默认30-40℃）、检测器波长（如254nm）及信号采集时间。
积分参数需根据峰形调整斜率灵敏度、峰宽等，保存方法后调用至序列模板。
样品运行
单针运行：选择样品瓶位置，填写样品名称，设置进样体积（如10μL），启动分析。
序列运行：批量导入样品信息，设置自动洗针功能，避免残留污染。
四、数据采集与分析
数据优化
调整信号范围（自动量程或自定义），优化基线噪声，使用积分事件处理复杂峰形。
校正表功能支持自动计算峰面积百分比或外标法定量。
报告生成
选择报告模板（简单/完整），导出PDF或Excel格式，支持自定义注释和色谱图标注。
五、关机与维护
系统冲洗
分析结束后，用95%水冲洗30分钟，再以100%有机相（甲醇/乙腈）冲洗20分钟，保护色谱柱。
含缓冲盐的流动相需额外用纯水冲洗45分钟以上，防止盐结晶堵塞管路。
仪器维护
每日检查泵头密封圈（推荐聚四氟乙烯材质），每月更换Seal-wash溶剂。
长期停用时，色谱柱需密封保存于高有机相中，避免纯水环境。
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